乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究

　　图1  FHV外壳蛋白的三维结构：示可供选择的外源抗原表位序列插入位点L1、L2、L3、I1、I2，I3HBV抗原表位氨基酸序列在FHV中插入位点。（略） ——免费论文来自www.17lw.com,一起论文网

　　图2  重组质粒NcoⅠ+NsiⅠ酶切图（略）

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　　2.2  携带HBV重组抗原表位的嵌和蛋白在BL21中的表达与鉴定  携带HBV抗原表位的重组质粒pETFHVE在BL21(DE3)转化细胞中高水平表达了携带HBV抗原表位的嵌合蛋白FHVE,其分子质量与阳性对照相同，约为45 000(等于载体FHV外壳蛋白的分子质量43 000加上HBV抗原表位的分子质量)。经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色(见图3)及Western blot(见图4)分析结果表明，重组抗原表位显示了抗原性。

　　图3  携带HBV a特异抗原表位的嵌合蛋白SDSPAGE(10%)分析（略）

　　图4  嵌合蛋白的Western blot分析（略） ——论文大聚合www.17lw.com,一起论文网

　　2.3  HBV重组抗原表位ELISA检测敏感性分析  我们用嵌和蛋白为包被抗原用间接ELISA法检测58份乙肝患者血清中抗HBs抗体，检测阳性率为77.5%，高于ELISA试剂盒检测的62%。

　　2.4  HBV重组抗原表位Western blot  以嵌和蛋白为包被抗原用Western blot检测58份乙肝患者血清中抗HBs抗体，检出阳性率为68%。　3  讨论

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　　3.1  HBV a抗原表位在疫苗及诊断应用研究中的意义  根据HBsAg S蛋白的抗原性不同，将HBV分为9个血清型(即HBsAg亚型)［6，7］：ayw1、ayw2、ayw3、ayw4、ayr、adw2、adw4、adrq-、adrq+。HBV S蛋白第120～第160氨基酸序列是HBV的交叉中和抗原表位即a表位［8］，可诱导产生交叉中和抗体，保护成人免受各HBV亚型的感染。本研究进一步表明，HBV a重组抗原表位可与临床不同来源的血清抗HBs发生特异性结合，具有疫苗研究和诊断意义。 ——内容来自www.17lw.com,一起论文网

　　3.2  新型抗原表位表达载体系统  对于抗原表位来说，决定其免疫原性和抗原性的因素除了氨基酸序列，更重要的是分子的空间构象和呈递给免疫细胞识别的方式。利用FHVRNA2表达载体在大肠杆菌中表达的抗原表位具有良好的免疫原性，免疫小鼠产生了交叉中和抗体［9］，并已成功的在该系统中表达了HIV1 V3、轮状病毒Vp4抗原表位和HCV抗原表位，并诱导中和抗体和交叉中和体产生［1，10，11］。HBV抗原表位在FHVRNA2载体系统可中高效地表达，并近似天然构象，能被天然抗HBs抗体特异性识别结合，具有良好的抗原性，在以其为包被抗原用ELISA和Wetern blot检测抗HBs中检测敏感性与ELISA诊断试剂盒差异无显著性，在HBV诊断试剂和重组抗原表位亚单位疫苗研究中具有重要意义。

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　　参考文献：

　　［1］  Scodeller EA，Tisminetzky SG，Porro F， et al.A new epitope presenting system display a HIV1 V3 loop sequences and induces neutralizing antibodies［J］.Vaccine,1995，13:12331239. ——内容来自www.17lw.com,一起论文网

　　［2］  Rosenberg AH,Lade BN,Chu D， et al.Vectors for selective expression of cloned DNAs by T7 polymerase［J］.Gene,1987，56:125135.
 
　　［3］  Towbin H，Staehelin T，Gorden J，et al.Electrophoretic transferof protein from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets：procedure and some application.Proc.Natl.Acad.Sci［J］.USA，1979，76：43504353. ——论文大聚合www.17lw.com,一起论文网

　　［4］  Tisminetzeky SG，Scodeller EA，Evangelisti P，et al .Immunoreactivity of chimeric protein carrying the HIV1 epitope IGPGRAF，correlation between predicted conformation and antigenicity［J］.FEBS Letters，1994，353：14. ——免费论文来自www.17lw.com,一起论文网

　　［5］  Fisher AJ and Johnson JE. Ordered duplex RNA controls the capsid architecture of an icosahedral animal virus［J］.Nature,1993,361:176179.

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　　［6］  Magnius LO， et al.A new virusspecified determinant of hepatitis B surface antigen［J］.Acta Pathol Microbiol Scan,1975，83B:295297. ——内容来自www.17lw.com,一起论文网

　　［7］  Wands J R， et al.Hepatitis B viral antigenic structure: signature analysis by monoclonal radioimmunoassays［J］.Proc Natl Acad Sci USA,1984，81:22372241. ——内容来自www.17lw.com,一起论文网

　　［8］  Moynihan JS，Dmello FI， et al. 48mer synthetic pptide analogue of the hepatitis B virus "a" determinant induces an antiHBs antibodies response after a single injection［J］.J Med Virol,2000，62:159166.

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　　［9］  Tisminetzeky SG.FEBS Letters,1994，353:14. ——内容来自www.17lw.com,一起论文网

　　［10］  陈元鼎.刘名英，邹永健，等.表达轮状病毒SA11株Vp4的抗原表位诱导病毒中和抗体生成［J］.中国病毒学，1997，12：125131. ——内容来自www.17lw.com,一起论文网

　　［11］  Peng M.Dai CB.Chen YD. Expression and immunoreactivity of an epitope of HCV in a foreign epitope presenting system［J］.World J Gastroenterol. 2005，11(22):33633367. ——免费论文来自www.17lw.com,一起论文网